长沙综仪生物科技有限公司
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离心机是生物实验中分离、纯化和浓缩样品的核心设备,其转速选择直接影响实验效果与样品活性。不同于固定的统一标准,离心转速需围绕实验目的精准适配,结合样品特性与设备条件综合判断。
1、大颗粒样品收集:低转速
此类目的主要针对细胞、血细胞、酵母等体积较大的颗粒,核心需求是快速收集样品,同时避免高转速导致颗粒损伤或压实难重悬。建议转速控制在800–2000 rpm,离心时间5–10分钟。适用场景包括培养哺乳动物细胞(如HEK293、Hela细胞)的收集、红细胞沉淀、酵母与真菌菌体富集等。需注意,过高转速会使细胞沉淀致密,后续重悬时易造成细胞破裂,影响后续培养或检测。
2、液体成分分离:中低转速
当实验目的为分离血清、血浆,或澄清组织匀浆、细胞培养上清中的杂质时,需通过适度离心使杂质颗粒沉淀,同时避免目标成分(如血清中的蛋白、上清中的活性因子)一同沉淀。建议转速设定为2000–3000rpm,离心时间10分钟左右。典型应用为血液血清分离,该转速可有效沉淀血细胞与凝血因子,保留澄清血清;也适用于组织匀浆后去除组织碎片,为后续纯化实验奠定基础。
3、中等颗粒分离:中高转速
针对细菌、线粒体、叶绿体等中等大小颗粒的收集与粗分离,需提高转速以克服颗粒浮力,实现高效沉淀。建议转速范围为5000–15000rpm,离心时间5–20分钟。例如,大肠杆菌、乳酸菌等细菌的收集可采用5000–8000rpm,既能快速沉淀菌体,又能避免菌体破裂导致胞内杂质释放;线粒体、叶绿体等细胞器的粗分离则需10000–15000rpm,配合差速离心法可初步分离不同细胞器。
4、核酸与蛋白沉淀:高转速
核酸(DNA/RNA)与蛋白质分子体积小、密度低,需较高转速才能从溶液中沉淀富集,尤其适用于乙醇沉淀核酸、硫酸铵盐析蛋白后的沉淀收集。建议转速控制在12000–16000rpm,离心时间5–15分钟。需注意,RNA分子更轻且稳定性差,若需沉淀RNA,可适当提高转速至16000rpm以上,并在4℃低温条件下离心,防止RNA降解;蛋白沉淀后需避免过度离心,以免影响蛋白复性活性。
5、微小颗粒纯化:超速离心
对于病毒、外泌体、蛋白复合物、核糖体等极小颗粒,普通离心机的转速无法提供足够离心力,需借助超速离心机实现分离与浓缩。建议转速范围为30000–100000rpm,离心时间1–3小时,部分场景需配合密度梯度离心法进一步提高纯度。该转速适用于外泌体浓缩、病毒纯化、蛋白复合物结构分析等高精度实验,操作时需使用专用超速离心管,严格遵循设备操作规程,避免安全风险。
若对样品特性与转速适配不熟悉,可通过三步判断法快速确定转速范围,降低实验误差:
第一步,判断目标颗粒大小:大颗粒(细胞、血细胞)选800–2000rpm;中颗粒(细菌、细胞器)选5000–15000rpm;小颗粒(核酸、蛋白)选12000–16000rpm;极小颗粒(病毒、外泌体)需超速离心。
第二步,明确实验需求侧重:若需保留上清液,转速不宜过高,避免杂质污染;若需收集沉淀,可适当提高转速,确保目标物完全沉淀。
第三步,考虑样品耐受性:细胞、活性酶等对转速敏感的样品,优先选择低转速;核酸、蛋白等耐受性较强的样品,可根据富集需求调整至合适高转速。
除转速选择外,离心温度、样品平衡、离心管适配也需同步关注。