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离心机如何从冷冻材料中提取DNA?

文章出处:长沙综仪生物科技有限公司 人气:601发表时间:2022-04-28

离心机是通过离心力分离液体的设备。根据物质的沉降系数、质量和密度的不同,利用强大的离心力分离、浓缩和提纯物质。一般来说,转速超过30000r/min的离心机称为超速离心。离心技术,尤其是超速离心,是分子生物学、生化研究和工业生产中必不可少的手段。离心机不仅可以检测物质的分子量,还可以检测物质的纯度、构象和沉降系数等。因此,离心技术在生物学研究中发挥着重要作用。它是分离和纯化细胞、蛋白质、核酸、酶以及对病毒进行分离的一种方便有效的工具。

离心机可用于冷冻材料DNA的提取:

一、所需试剂

  1.2倍CTAB提取缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.0),20 mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2%CTAB,40mmol/Lβ-巯基乙醇。

  2.10%CTAB:10%CTAB,0.7mol/L NaCl。

  3.1倍CTAB沉淀缓冲液:50mmol/L Tris·Cl(pH8.0),10mmol/L EDTA,1%CTAB,20mmol/Lβ-巯基乙醇。

  二、具体操作

1、取新鲜植物材料1-50g,在液氮中研磨成粉末。

  2、将冻粉转移到预冷离心管中,立即加入等体积65℃预热的2倍CTAB提取缓冲液充分混合,在65℃下保持10-20分钟,并不时摇动  

3、加入等体积的氯仿/异戊醇,轻摇离心管混匀。在室温下以12000r/min的速度离心10-20min  

4、将上清液移入另一离心管,加入1/10体积的10%CTAB,混匀,加入等体积的氯仿/异戊醇,倒置离心管混匀,在室温下以12000r/min离心10min  

5、取上相,重复的操作一次  

6、将上相移到新的离心管,离心管须先经硅烷化处理。在离心管中加入1-1.5倍体积的1倍CTAB沉淀缓冲液,混匀并在室温下放置30分钟,观察是否生成沉淀。如果没有明显的沉淀,延长放置时间,沉淀量会随着放置时间的延长而增加

7、以3500-4000r/min离心5-10min,除去上清液,沉淀吹干,备纯化用。


关键词:
400-778-9906

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